- سایت ژندیا
- بلاگ
منو
بافت FFPE معمولاً در تجزیه و تحلیل هیستوپاتولوژیک استفاده می شود. اخیراً، علاقه بیشتری به بررسی تغییرات RNA، بیان RNA یا پروفایلهای miRNA نمونههای قدیمی و آرشیو شده FFPE وجود دارد. با این حال، تثبیت و ذخیره سازی بافت منجر به اتصال عرضی و تکه تکه شدن RNA می شود. به خصوص اتصالات عرضی را نمی توان با سنجش های استاندارد کنترل کیفیت، مانند ژل الکتروفورز، اسپکتروفتومتری یا آنالیز میکروفلوئیدیک تشخیص داد اما کارایی واکنش های آنزیمی به طور قابل توجهی کاهش می یابد، به عنوان مثال در RT-PCR. روشهای استاندارد خالصسازی RNA این تغییرات شیمیایی را حذف نمیکنند و بنابراین منجر به بازدهی کم RNA یا عملکرد ضعیف کاربرد پاییندستی میشوند. این کیت، بافرها و مراحلی را برای جداسازی مؤثر اسیدهای نوکلئیک متقاطع و تولید RNA با کیفیت بالا برای سختترین کاربردها اجرا میکند.
این کیت استخراج از یک پروتکل ساده، قابل اعتماد و بدون فنل برای جداسازی RNA از بخش های بافت FFPE استفاده می کند. ابتدا مقاطع بافتی با حل کننده پارافین، پارافین زدایی می شوند و سپس در محلول های مبتنی بر اتانول شسته می شوند تا محلول پارافین زدایی حذف شود. سپس با پروتئیناز K تیمار می شوند تا بافت تثبیت شده حل شود و اسیدهای نوکلئیک در محلول آزاد شوند. در نهایت، Total RNA جدا می شود. پروتکل جداسازی RNA با تعلیق نمونه در بافر اتصال RNA، حاوی یک پروتئین دناتوره کننده قوی (نمک گوانیدین) که از تخریب ریبونوکلئاز (RNase) RNA جلوگیری می کند، آغاز می شود. نمونه با استفاده از یک میکرو اسپین حاوی ماتریس فیبر مبتنی بر سیلیس، فیلتر می شود. اسیدهای نوکلئیک موجود در نمونه به ماتریس فیبر متصل می شوند و سپس جزء RNA به طور موثر از نمونه متصل به ماتریس حذف می شود. RNA برای حذف آلاینده ها شسته می شود و Total RNA در حجم نهایی 30 میکرولیتر بازیابی می شود. RNA جداسازی شده برای تجزیه و تحلیل بیان ژن توسط qRT-PCR آماده است.
Components | Product # EK0350R (50 preps) | Product # EK03100R (100 preps) | Product # EK03200R (200 preps) |
Paraffin Dissolver | 50 ml | 100 ml | 100 ml*2 |
GeneWB | 10 ml | 20 ml | 40 ml |
GeneLB | 10 ml | 20 ml | 40 ml |
GeneBB | 25 ml | 50 ml | 100 ml |
GeneWB1 | 20 ml | 40 ml | 80 ml |
GeneWB2 | 20 ml | 40 ml | 80 ml |
GeneEB | 3 ml | 6 ml | 12 ml |
Proteinase K | 1 ml | 2 ml | 2 ml*2 |
Spin Columns | 50 | 100 | 200 |
Collection Tubes | 50 | 100 | 200 |
Elution tubes (1.7 mL) | 50 | 100 | 200 |
Product Insert | 1 | 1 | 1 |
شرایط نگهداری کیت:
تمام اجزای کیت به جز پروتئینازK (در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری شود) باید در دمای اتاق (25-20 درجه سانتیگراد) نگهداری شوند و به مدت 1 سال پایدار است.
شرایط نگهداری DNA:
DNA خالص سازی شده برای چند هفته در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری می شود. توصیه می شود که نمونه ها برای نگهداری طولانی مدت در دمای 70- درجه سانتیگراد قرار داده شوند.
💙کلیه حقوق مادی و معنوی برای شرکت ژرفا نگاران دنیای تشخیص محفوظ می باشد💙