کیت استخراج RNA از بلوک پارافینه (FFPE)

بافت ثابت شده با فرمالین و پارافین تعبیه شده (FFPE) معمولاً در تجزیه و تحلیل هیستوپاتولوژیک استفاده می شود. اخیراً، علاقه بیشتری به بررسی تغییرات RNA، بیان RNA یا پروفایل‌های miRNA نمونه‌های قدیمی و آرشیو شده FFPE وجود دارد. با این حال، تثبیت و ذخیره سازی در پارافین منجر به اتصال عرضی و تکه تکه شدن RNA می شود. به خصوص اتصالات عرضی را نمی توان با سنجش های استاندارد کنترل کیفیت، مانند الکتروفورز ژل، اسپکتروفتومتری یا آنالیز میکروسیال تشخیص داد، اما کارایی واکنش های آنزیمی به طور قابل توجهی کاهش می یابد، به عنوان مثال در RT-PCR. روش‌های استاندارد خالص‌سازی RNA این تغییرات شیمیایی را حذف نمی‌کنند و بنابراین منجر به عملکرد کم RNA یا عملکرد ضعیف کاربرد پایین‌دستی می‌شوند. کیت استخراج RNA از بلوک پارافینه GENEDIA بافرها و فرآیند هایی را برای جداسازی موثر اسیدهای نوکلئیک متقاطع و تولید RNA با کیفیت بالا برای کاربردهای خاص اجرا می کند.

کیت استخراج RNA از بلوک پارافینه GENEDIA از یک پروتکل ساده، قابل اعتماد و بدون فنل برای جداسازی RNA از مقاطع بافت FFPE استفاده می کند. ابتدا مقاطع بافتی با حلال پارافین، پارافین زدایی می شوند و سپس در محلول های مبتنی بر اتانول شسته می شوند تا معرف پارافین زدایی حذف شود. سپس، مقاطع با پروتئیناز K تیمار می شوند تا بافت ثابت شده حل شود و اسیدهای نوکلئیک در محلول آزاد شوند. در نهایت، RNA کل جدا می شود. پروتکل جداسازی RNA با تعلیق نمونه در اتانول مطلق آغاز می شود که حاوی یک پروتئین دناتوره کننده قوی است که از تخریب ریبونوکلئاز (RNase) RNA جلوگیری می کند. نمونه با استفاده از یک میکرو اسپین حاوی ماتریس فیبر مبتنی بر سیلیس، فیلتر می شود. اسیدهای نوکلئیک موجود در نمونه به ماتریکس فیبر متصل می شوند و سپس جزء RNA به طور موثر از نمونه متصل به ماتریس حذف می شود. RNA بی حرکت برای حذف آلاینده ها شسته می شود و RNA کل در حجم نهایی 30 میکرولیتر بازیابی می شود. RNA خالص جدا شده برای تجزیه و تحلیل بیان ژن توسط qRT-PCR آماده است.

ffpe rna manual

ffpe rna workflow